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背景
钠/牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)是一种几乎只在肝细胞窦膜上表达的多通道跨膜蛋白。NTCP约占胆汁酸(BA)摄取的90%，是第一个克隆的BA转运体。NTCP也是乙型肝炎病*及其卫星病*丁型肝炎病*病*进入的关键受体。NTCP表达受BAs、雌激素和催乳素等激素、药物、*素和促炎细胞因子控制。此外，NTCP经历涉及磷酸化或去磷酸化的翻译后调控，从而介导其定位。涉及环腺苷酸、钙、一氧化氮、磷酸肌醇3-激酶、蛋白激酶C(PKC)和蛋白磷酸酶的信号通路介导这种翻译后调控。胆汁淤积症患者和胆道梗阻、雌激素或内*素诱导的胆汁淤积症动物模型中，NTCP表达减弱。
简介
年7月15日，来自以色列耶路撒冷的医院肝脏科的RifaatSafadi及其团队在Gut(IF:19.)杂志上发表名为Sodium/taurocholatecotransportingpolypeptideastargettherapyforliverfibrosis的研究[1]。
研究亮点
1、首次在肝星状细胞(HSCs)上发现牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)，一种胆汁酸转运蛋白。
2、本研究数据表明，HSC活化可能是通过NTCP摄取胆汁酸的第二个步骤。
3、NTCP阻断阻止了LF的发展，为其用于LF的治疗提供了进一步的证据。
主要结果
LF患者造血干细胞NTCP表达与纤维化进展呈线性相关
人类肝细胞已显示出表达NTCP，其表达在胆汁淤积症患者中下调。NTCP介导肝和肠BA摄取。我们确认(数据未显示)从LF患者获得的肝活检的肝细胞中存在NTCP；然而，在这些患者中，没有NTCP在HSCs上表达的数据。在纤维化肝脏中，静止的HSCs转分化为增殖性、迁移性和收缩性肌成纤维细胞，从而表现出促纤维化特性，如αSMA积聚。图1A-C显示了从F0、F1/F2和F3/F4评分患者的LF活检中获得的分离的pHSCs上的NTCP表达。培养这些pHSCs，并在48小时后评估NTCP表达(细胞融合)。共焦显微镜检查显示，与F0评分患者(图1A)相比，F1/F2评分(图1B)和F3/F4评分(图1C)患者中用NTCP染色的pHSCs代表图像的强度/表达较高，支持F3/F4评分患者。我们通过列举每个字段表示为phscntcp+/field的NTCP的pHSCs来量化pHSCs上的NTCP。图1D显示F3/F4评分患者中NTCP染色的pHSCs数量增加，与图1C中NTCP强度增加一致(p0.)。
图1.活化的原代肝星状细胞(pHSCs)和LX2呈高NTCP表达
NTCP调解LX2的BAs贩运
为了评估HSCs上的NTCP效应是否在肝细胞中介导BAs摄取方面具有相同的作用，我们用含MTCA的缓冲液处理了LX2NTCP+细胞，该缓冲液中补充了放射性标记的0.25μC[3H]TCA(一种NTCP生理底物；受体激动剂)45分钟。为了调节TCA摄取，我们使用NTCP中和抗体，试图在TCA损伤前阻断NTCP。之后每隔45分钟在培养基和LX2NTCP+溶胞产物中测定TCA水平。图2A显示，当与LX2NTCP+一起培养时，培养基中μM的TCA浓度在15、30和45min分别降低至43±1.2、11.3±0.1和2.4±0.2μM(p值0.01)。同时，细胞裂解物中的TCA细胞内浓度显示，在TCA孵育45分钟后，显著从±1.3μM升高至±1.3μM(p值0.03；图2B)。
图2.TCA的HSC转运
阻断LX2NTCP+的表达可抑制TCA损伤后LX2NTCP+的激活
通过在TCA和DMSO(一种NTCP非生理激动剂)的损伤后，通过使用选定的siRNAs-NTCP敲除研究了NTCP诱导LX2激活的功能特性。将1%表达低NTCP的流式细胞仪中分选的LX2NTCP+与上述激动剂一起孵育。图3A显示了在用激动剂治疗后观察到的升高的NTCP，并因此触发了HSC激活。siRNA转染的LX2NTCP+防止激动剂损伤诱导αSMA升高，并在体外培养试验中强调NTCP调节效应在调节HSC激活中的潜在作用。通过进行不同的实验来阐明HSC激活中的NTCP表达；分选的LX2NTCP+首先通过用10%FCS培养而被激活(以进一步刺激NTCP表达)，然后用EGCG处理以试图诱导NTCP内吞。
图3.体外抑制NTCP降低了LX2NTCP+的αSMA
NTCP中和抗体抑制CCl4模型小鼠的LF谱
其他人和我们之前已表明，在CCl4纤维化小鼠模型f中，肝脏HSCs表达促纤维生成标记物并促进LF。然而，之前未研究NTCP在纤维生成中的作用。肝脏切片的代表性HE、天狼星红和Masson’s三色染色如图5A所示。CCl4肝脏的HE染色显示小叶中心肝细胞肿胀，高浸润炎性细胞大面积坏死，伴脂肪变性。NTCP中和抗体治疗逆转了这些组织学发现，微血管和大血管脂肪变性显著减少。天狼星红染色显示，在CCl4治疗后，窦周区域胶原沉积增加；而NTCP中和抗体导致染色区域的纤维致密组织显著减少。
图5.NTCP中和抗体抑制CCl4模型小鼠LF
喂食HFD(Ob/ObHFD)的Ob/Ob小鼠在NTCP中和抗体后显示肝损伤和代谢水平降低
Ob/ObHFD表现出几个关键的NASH特征，包括脂肪变性和肝细胞气球样变，并发展为显著的纤维化。我们采用了这一模型，以便用一个额外的小鼠模型证实从NTCP中和抗体对LF的作用中获得的数据。对NTCP中和抗体进行了2周的腹膜内治疗。从Ob/ObHFD获得的肝脏活检显示，与野生型(WT)同窝小鼠相比，共聚焦显微镜显示HSC表达高NTCP(图6A)。NTCP中和抗体显示NTCP没有表达HSCs，数据在图6B中总结为表达NTCP/field的HSCs数量。
图6.NTCP中和抗体改善高脂饮食喂养的瘦素缺乏小鼠的炎症、纤维化和代谢状况
结论及展望
我们的研究首次描述了从LF患者获得的人肝HSCs上存在NTCP。NTCP表达与纤维化程度呈线性相关。我们还发现，NTCP介导HSC对BAs的摄取，从而触发其激活。在体外和体内小鼠模型中，NTCP的失调通过其抑制作用引发HSCs失活。在CCl4诱导的小鼠模型中，靶向NTCP对于减少肝脏中的BAs的累积从而减弱LF至关重要。总之，NTCP表达与纤维化程度呈线性相关。调节BA转运可能是LF发病机制中的重要一步。拮抗BA摄取可能是一种预防疾病进展的治疗策略。
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