实体瘤中的CART细胞挑战和机遇 [复制链接]

经过CAR修饰的T细胞具有超生理特性，并具有“活体药物”的功能，不仅可以证明在T细胞中表达后的即时作用，而且可以证明其长期作用[3]。为了在T细胞中进行CAR工程改造，必须对细胞进行培养，以便将其用于转导和扩增。在这个过程中，转导可能会采用多种方法，但是必须建立基因转移才能在克隆扩展和持久的T细胞中持续表达CAR（图1）[4]。

考虑到原理，CAR可以靶向在细胞表面表达的抗原，CAR可以靶向多种T细胞亚群，T细胞祖细胞和其他免疫细胞，特别是自然杀伤（NK）细胞[5]。建立针对特殊抗原的免疫反应性并不是更智能的CAR的唯一治疗目标，而这些细胞的设计目的不仅仅是触发工程化的T细胞活化和功能。重要的是，具有显着潜力和信号质量的CAR可以调节T细胞的扩张和毅力，以及癌症微环境中工程T细胞活化的强度，这些特性强烈地改变了以癌症为目标的T细胞功效以及安全性。

根据生物学和分子研究，CAR传递比转导的T细胞受体（TCR）具有更广泛的功能作用，在TCR中，通常由TCR对靶抗原的亲和力修饰的信号传导能力是转导T细胞受体的中心因素，决定T细胞的命运[6]。尽管灵活性与工程化CAR的动态范围有关，并且非常有前途和理想，但CAR只能识别位于细胞表面的标记物。另一方面，CARs在不依赖MHC分子的情况下诱导靶细胞死亡[7]。考虑到它们对T细胞特异性的影响以及效价和安全性，我们在这里讨论了靶向和发信号通知工程化CAR的拥有权。

在这篇综述中讨论了涉及T细胞扩增和该细胞亚群收集的程序。总体而言，基于嵌合抗原受体构建的模块性质，CAR正在迅速发展，并显示出在广泛的免疫疗法中有效使用的显着能力[8]。

CAR包含一个细胞外抗原识别域，该域由识别癌细胞细胞膜上特定蛋白质（例如实体瘤细胞上的EGFR或B细胞上的CD19）的单克隆抗体片段和一个提供T细胞受体（TCR）信号触发CART细胞活化和功能[9，10]。第一代CART细胞包含来自TCRCD3ζ链的细胞内结构域，该结构域诱导T细胞对靶向癌细胞的细胞*性作用，但在重新输注后不能促进CART细胞在体内的扩增。另一方面，第二代和第三代CART细胞包含额外的共刺激细胞内结构域，这反过来又增强了CART细胞生长，扩展并最终在患者体内持久的潜力（图2）[11,12,13]。

---------------CART细胞工程------------

当开发出人类原代T细胞转导方案时，开始以各种方式研究CAR。在过去的十年中，几乎所有CAR研究都基于使用逆转录病*载体，例如γ-逆转录病*载体和慢病*载体[14]。尽管逆转录病*载体能够刺激人细胞中的插入肿瘤发生，但T细胞似乎对这些转化的敏感性要低得多。支持任意载体整合的转座酶已开始在CAR治疗领域进行评估[15]。尽管尚未弄清常用载体的优缺点，但该比例与CAR表达范围，随着时间的推移沉默，工程简便性，安全性等密切相关。但是，由于插入诱变而引起的T细胞转化尚不明确。迄今已确认；将载体直接整合到基因组的安全区域中，最终可以导致长期CAR表达，而没有发生插入诱变的风险[16]。

独立于转基因整合的替代策略，使用RNA电穿孔或细胞表面偶联，依次导致CAR瞬时表达和CART细胞持久性限制超过7-14天[3]。可能需要多次输注才能产生可接受的肿瘤反应的瞬时表达CAR的T细胞的显着特性可能会减弱正常组织损伤或避免T细胞聚集至支持细胞因子风暴风险的水平。

在这方面，CAR转移的另一个重要方面是接收方，并认识到哪种T细胞（例如CD4+，CD8+αβT细胞和γδT细胞）优于其他类型的T细胞，以实现最佳的肿瘤抑制效果[17，18]。

---------CAR的细胞内信号传导途径-------

如所注意到的，表现出显着的T细胞刺激能力的第一个工程受体是CD3-ζ或Fc受体γ与CD8，CD4，CD25或CD16之间的嵌合分子，它们刺激了和钙内流相关的磷脂酰肌醇和酪氨酸激酶信号级联反应。将鼠类抗体半抗原特异性的scFv添加到人类白血病T细胞这些融合的胞外部分[19，20]，这些部分被描述为T体并可以接受地促进细胞溶解。尽管CD3-ζ链的增加足以支持细胞*性T细胞（CTL）系的细胞溶解功能，但已发现，呈现细胞*性活性的基本信号强度比其他类型的功能低[21]。一旦研究人员可以有效地转导人原代T细胞，他们就会注意到CD3-ζCARs不能在识别目标抗原后刺激细胞因子的剧烈释放并改善T细胞的生长。

因此，设计了含有CD3-ζ链和共刺激受体胞质结构域（例如CD28和4-1BB）的第二代CAR。在使用小鼠或人类T细胞的各种类型的模型中，显示了第二代CAR与第一代CAR相比理想的功能[23,24,25]。双信号受体的主要特性是支持T信号的强大潜能和毅力，从而确保T细胞具有总体上的超强效能。在一项研究中，尽管研究人员发现基于CD28和4-1BB的CD19特异性CAR的治疗活性没有显着差异，但他们描述了表达CD19-BBCAR的T细胞聚集了较高水平，可能与抗原无关方式[27]；另一方面，在其他模型中，引用差异没有得到认可[28]。似乎需要更全面的研究，注意到这些研究必须集中于任一给定类别内嵌合受体之间的差异。例如，各种CD28/CD3ζCAR提示白介素2分泌的潜能各不相同[29，30]。此外，目标表位的特殊位置，其浓度与CARs亲和力相关，以及CAR结构的其他拓扑影响都可以修饰CAR信号传导。

第三代CARs在其细胞质部分包含两个不同的共刺激结构域，并在其细胞质部分具有特殊的激活结构域，在多种小鼠模型中显示出了更大的治疗实体瘤的能力[31，32]。尽管使用CD20特异性CD28/4-1BB/CD3ζ进行的第一项临床研究并未暴露出理想的反应，但这些结果不应因这些“三层”嵌合受体的治疗重要性而降低[33]。

总的来说，希望有更多的研究来获得对最佳CAR信号传导的更全面的了解，以改善持久性T细胞活性和生存力，降低过早死亡率，迅速衰竭或不受控制的进展。

-----肿瘤相关抗原的识别，表达水平和对CART细胞的敏感性-----

实体瘤与血液疾病之间的主要区别在于，检测理想的靶抗原更加复杂（图3）。与癌细胞通常表达特殊和单个标志物的血液系统恶性肿瘤不同，实体瘤通常不表达一种肿瘤特异性标志物。通常，在实体瘤中，更常见的是识别肿瘤相关抗原（TAA），无论其在癌细胞上增加了诸如CEA，ERBB2，EGFR，GD2，间皮素，MUC1和PSMA等标志物的表达。

应该注意的是，这些标记物在人体的天然组织中的表达也很低[34，35]。毫无疑问，在没有肿瘤抗原特异性的情况下，显着增加靶上非肿瘤*性的风险显着增加。这种灾难性*性发生在接受Her2-CART细胞转移性CRC的患者[36]和接受GD2-CART细胞治疗的成神经细胞瘤的患者中[37]。据报道，这些令人失望的事件凸显了鉴定安全TAA的价值，因为即使从较低的特殊抗原比率中也可以产生明显的*性。

此外，这些反应还表明，CAR的连接亲和力与其相关的安全性和功效之间存在密切的联系。一项体内研究表明，与具有nM亲和力的CAR相比，利用具有μM亲和力的ICAM-1特异性CART细胞具有低水平的副作用，并且更有效[38，39]。

此外，研究表明，具有较低亲和力的CAR在体内表现出低水平的疲劳和促进增殖。在这方面，其他研究表明，GUCY2C特异性CART细胞（一种在转移性CRC中约95％表达的受体）不仅对具有免疫能力的侵袭性癌症小鼠而且在人类异种移植模型中都是安全有效的[40]。

总之，必须仔细评估正常组织上表达的肿瘤上异常或过表达的抗原，以将其描述为实体瘤治疗的靶抗原。

在最近的十年中，各种实验小组利用免疫蛋白质组学利用针对免疫原性抗原的自身抗体来识别TAA，所述免疫原性抗原在细胞质或癌细胞表面功能性表达[41]。这些靶抗原可能是完全未被识别的蛋白，即众所周知的新抗原，或称为新表位的野生型突变肽[42]。

PSMA1，LAP3，ANXA3和maspin是蛋白质组学公认的TAA之一，被认为是CRC的生物标志物[43]。新抗原还可以通过DNA或RNA测序识别，也可以使用全外显子组筛选研究癌症中的体细胞突变[44，45]。基于使用黑色素瘤全外显子组测序[46]和多形性胶质母细胞瘤（GBM）样本的研究在这些患者中显示出多个突变表位[42]。对于新抗原的预测，在PDA患者中进行了全外显子测序，并且发现更多数量的新抗原与更多数量的CD8+TILs共同促进了存活率的提高[47]。一些研究评估了CD40激动剂改善T细胞对实体瘤免疫力的潜力，发现CD40激动剂能够增强T细胞对免疫原性肿瘤抗原的反应[48]。

在这方面，在PDA模型中，化学疗法与CD40激动剂相结合，表现出T细胞的浸润过程和新抗原特异性反应以及肿瘤抑制作用[49]。这些使用新表位的研究表明，肿瘤可以触发针对先前未知标记的继发免疫反应，而与新抗原相关的内源性免疫可能会调节肿瘤的进程。这些发现突出了过继性T细胞疗法（例如基于CAR的治疗方法）的重要性。

尽管大量研究证实了新表位具有识别先前存在的TCR反应性的潜力，但新表位的检测和利用CART细胞靶向这些表位可能会绕开该受试者的重要性，因为CAR充当了MHC依赖性受体。

---实体瘤中的CART细胞疗法：最新进展---

考虑到使肿瘤能够抑制T细胞的众多方法，可以在临床上检查的细胞工程和联合疗法的数量是无限的。在这方面，在临床翻译之前，仔细研究治疗组合的可靠的临床前模型是非常有趣的。尽管我们的重点不是基于CAR的试验，但在本部分中，我们简要评估了实体瘤CART治疗的最新研究，并简要讨论了它们的功效和重要的靶向表面标志物（图4）（表1和2）。

如所引用的，实体瘤倾向于显示高水平的抗原异质性。根据研究，肿瘤通常仅具有强烈表达靶抗原的细胞分裂，并且通常存在靶抗原被破坏并从癌细胞中清除的风险[50]。

尽管已经在输注CD19-CART细胞后用白血病细胞证实了这一事件，但尚未很好地确定所涉及的过程[51]。但是，一项研究调查了以CD19形式引起的特定突变，该突变丢失了基于CD19的CART细胞靶向的特殊表位[52]。在使用EGFRvIII特异性CAR治疗GBM的临床试验中，CART细胞给药可抑制EGF/EGFRvIII受体表达并似乎增强T细胞抵抗力，但输注被证明是无*且有效的[53]。此外，在GBM模型中，基于CART细胞的IL13Rα2在体内扩增并释放各种细胞因子，但在复发性肿瘤中显示出对IL13Rα2表达的抑制作用[54]。

----------------乳腺癌----------------

周等表明在三阴性乳腺癌（TNBC）细胞MUC28zCART细胞上识别tMUC1后，MUC28zCART细胞是一种特异性组成的包含CD28和CD3ζ结构域的嵌合抗原受体，可放大粒酶B，IFN-γ和其他类型的Th1分泌的细胞因子和趋化因子。在这项研究中，单剂量的MUC28zCART细胞在异种移植模型中大大降低了TNBC肿瘤的增殖和存活率[60]。其他研究表明，CD27或4-1BB共同刺激的，自我富集的NKG2DCAR重定向T细胞具有针对TNBC肿瘤的抗癌功能[61]。其他研究表明，基于HRG1β的CAR-T细胞可通过HER家族受体成功抑制乳腺癌的增殖，并能够提供有吸引力的治疗方法，以克服针对基于HER2的靶向治疗的癌症耐药性[62]。同时，Munisvaradass等人。发现人类抗HER2CART细胞在过度表达HER2的乳腺癌细胞中表现出理想的靶向作用并触发了细胞死亡[63]。此外，特殊的CART细胞对间皮素的识别已被描述为乳腺癌治疗的有希望的免疫治疗目标[64]。

---------------前列腺癌----------------

前列腺干细胞抗原（PSCA）和前列腺特异性膜抗原（PSMA）通常用于靶向嵌合抗原受体，从而在前列腺癌（PC）中达到适当的治疗效果[]。抗PSMA的CART细胞显示出对人PC细胞的强大能力，并在PC细胞中显示出强大的扩增和细胞*性潜能[28，65]。Junghans等人进行的临床试验[66]和Slovin等[67]批准了PSMA定向的CART细胞在PC中的安全性和有效性。

----------------肾癌-----------------

根据报道，在各种类型的肾癌中表达的羧基酸酐酶IX（CA-IX）已被视为CART细胞疗法的新靶标。CA-IX是一种金属蛋白酶，通常参与二氧化碳水合的催化作用[13，68]，而它可作为肾细胞癌和几种正常组织（包括胃粘膜上皮，小肠上皮和十二指肠）中的关键抗原，胆道树适度表达[69]。另外，低氧条件可能导致多种组织中CA-IX的表达[70]。已经发现，针对肾癌细胞的第一代CAIX-CART细胞与细胞*功能相关地参与了高度细胞因子的分泌[71]。

-------------------胃癌-------------------

最近的研究表明，双特异性Trop2/PD-L1CAR-T细胞可以通过肿瘤内注射显着降低胃癌的生长，其抑制作用比Trop2特异性CAR-T细胞更为显着。这些发现表明，新型双特异性Trop2/PD-L1CAR-T细胞参与了Trop2/PD-L1和检查点对胃癌的阻断作用，从而促进了CAR-T细胞在胃癌和其他类型实体瘤中的细胞*性作用[72]。此外，已经证实，注射包含间皮素scFv，CD3ζ，CD28和DAP10细胞内信号传导域（M28z10）的间皮素-CART细胞后，胃癌细胞死亡被触发，肿瘤的生长受到明显抑制[73]。根据其他研究，使用claudin18.2-CART细胞[74]，NKG2D-CART细胞[75]，叶酸受体1（FOLR1）-CART细胞[76]和HER2-CART细胞[77]可以被认为是胃癌治疗的一种新的治疗方法。在最近的一项研究中，Jung等人研究表明，ICAM-1CART细胞单独使用或与化疗药物紫杉醇或CART细胞联合使用可改变IL-12的释放，这是一种有望大大改善ICAM-1高级别胃癌患者的有前途的方法[78]。

------------------胰腺癌------------------

研究证实，在胰腺癌中，表达CXCR2的CART细胞向含有IL-8和IL-8的微环境更有效地转移。结果，表达CXCR2的CART细胞对公认的表达αvβ6的胰腺肿瘤异种移植物具有更大的抗肿瘤活性[79]。此外，已证明B7-H3.CAR-T细胞在体外和原位以及转移性异种移植小鼠模型中均可治疗胰腺导管腺癌。有趣的是，当我们要靶向PD-L1组成型表达的肿瘤细胞时，4-1BB共刺激支持更低的PD-1在生成的T细胞中的表达，以及更高的抗肿瘤活性[80，81]。

此外，对肝细胞癌，胰腺癌和结直肠癌患者的I期临床研究显示出CD-CART细胞对这些细胞转移潜力的抑制作用[82]。此外，其他类型的胰腺癌CART细胞治疗靶抗原包括CD24[83]，PSCA[84]，CEA[85]，MUC-1[86]，间皮素[87]，FAP[88]和Her-2[89]已为人所知，目前正在临床前和临床试验中进行研究。

------------------肺癌-----------------

受体酪氨酸激酶样孤儿受体1特异性（ROR1）-CART细胞的治疗在人类肺癌A细胞系中支持强大的抗肿瘤活性。重要的是，ROR1-CART细胞渗入癌组织并根除肿瘤细胞的多层[90]。类似地，在表达和释放穿孔素，颗粒酶B，IFN-γ和TNF-α等细胞因子后，EGFRvIII-CART特异性和有效地鉴定并杀死A-EGFRvIII细胞。另一方面，研究表明，EGFRvIII-CART细胞可显着减少小鼠A-EGFRvIII细胞的转移，并且可有效延长小鼠生存期，且无任何副作用[91]。同样，已经证实基于CART细胞的间皮素[92]，产生促红细胞生成素的肝细胞癌A2（EphA2）[93]，PSCA和粘蛋白1[94]可以在肺癌中产生理想的治疗效果。最近，一组研究人员建议在非小细胞肺癌（NSCLC）中使用PD-L1-CART可能具有针对PD-L1high和EGFRmutNSCLC的抗肿瘤细胞*活性，并在一定程度上导致患者的康复（PD-L1+）NSCLC[95]。另一方面，Chen和他的同事介绍了delta-like3（DLL3）作为治疗小细胞肺癌（SCLC）的有吸引力的靶标。他们表明，仅以抗体和CAR-T细胞为靶标或与PD-1抑制一起靶向的DLL3可以杀死DLL3肿瘤细胞，包括H82，H和H细胞系[96]。

------------------肝癌------------------

CAR-T疗法在肝癌治疗中的应用才刚刚开始研究，需要进行更多的研究。但是，基于CAR-T细胞的CEA[97]，glypican-3[98]，mucin-1，上皮细胞粘附分子和癌胚抗原[99]的功效已在肝癌治疗中得到证实。Glypican-3（GPC3）抗体与CART疗法联合使用可能是治疗肝恶性肿瘤的有用方法。Liu和他的同事们发现，使用32A9单克隆抗体/CART细胞可在体外杀死（GPC3+）HCC细胞，并在体内消退肝异种移植肿瘤[]。另一项研究表明，表达IL15/21的GPC3/CART细胞可促进T细胞对HCC的抗肿瘤反应[]。

-------------------大肠癌-------------------

研究发现，嵌合抗原受体T细胞疗法可能是一种有效的结直肠癌治疗方法。总体而言，在结直肠癌中，NKG2D[]，CD[82]，GUCY2C（瓜那酸酯环化酶2C）[40]和TAG-72[]是达到有希望的治疗目标的最主要靶抗原。洪巴赫（Humbach）等人。研究表明，经工程改造释放IL-7/12细胞因子的间充质干细胞（MSC）通过改变肿瘤环境中Th2到Th1/17执行结构的炎症作用，提高了CART细胞对结直肠癌细胞的抗肿瘤活性[]。根据以前的证据，人类结肠直肠肿瘤中Doublecortin样激酶1（DCLK1）表达的升高与更高的死亡率相关。最近的一份报告显示，DCLK1的靶向CAR-T治疗有效根除了原发性和转移性结肠癌细胞[]。

-------CART细胞疗法对实体瘤的挑战------

本节讨论了实体瘤中CART细胞疗法的基本挑战以及增强治疗效果的有用策略。下面列出的挑战是干扰细胞治疗并影响治疗有效性的最重要障碍，具体取决于肿瘤类型，疾病步骤和分子标记。

----------------肿瘤抗原异质性-------------

细胞疗法对抗实体瘤的有效性的障碍之一是抗原异质性，其削弱了T细胞对癌细胞的检测并降低了CART疗法的影响。由于CAR工程最有用的靶标是肿瘤相关抗原（TAA），因此不同类型肿瘤细胞对TAA的多样化表达是主要障碍。此外，由于恶性细胞抗原多样性使得难以鉴定肿瘤细胞特异性抗原，在各个肿瘤部位的抗原表达水平不同可能会损害CART细胞在肿瘤部位的功能[]。

迄今为止，已使用多种方法来支持已鉴定的CART细胞靶向多个TAA，包括在单个T细胞上共表达多个CAR，可编程CAR表达，靶抗原临时调节的可能性，利用各种CART细胞，每种嵌合受体相对于特定抗原的表达以及包括两个或多个抗原识别域的嵌合受体的表达，进而导致多种抗原通过单个受体进行鉴定[]。另一方面，靶向与肿瘤异质性密切相关的癌症干细胞是消除肿瘤异质性的方法之一。例如，CD是一种肿瘤干细胞标记物，在许多实体瘤中均过表达，现在被认为是CAR-T细胞的靶肿瘤标记物[13]。

------------递送并浸润到肿瘤组织中--------

在实体瘤中，CAR-T细胞疗法比在血液肿瘤中受到更多限制，因为CAR-T细胞返回血流和淋巴系统，因此它们与血液肿瘤细胞接触更多，而在实体瘤中，CAR-T细胞可能不会能够通过血管内皮穿透肿瘤组织[]。肿瘤组织中一系列机制的存在减少了血管相关因子的分泌。例如，癌组织中内皮素B受体的过表达下调了ICAM-1的水平，从而防止T细胞从血管中逸出[]。另一方面，实体瘤中CAR-T细胞的迁移取决于趋化因子如配体11和12个趋化因子的调节[]。但是，这些趋化因子在肿瘤组织中表达较少。总之，由于缺乏参与T细胞渗透到肿瘤组织中的趋化因子的表达，以及实体瘤中存在致密的纤维化基质，CAR迁移和侵袭肿瘤细胞的能力降低了[71]。鉴定实体瘤需要细胞从血液过渡到癌症部位，并且会出现各种异常情况，从而大致阻止T细胞浸润[，]。已经提出，在肿瘤受限的部位，CART细胞的局部给药比全身给药更有效。在胶质母细胞瘤中，颅内运输已被证明是安全的并具有可接受的抗癌作用[]，在人类胸膜恶性临床前研究中，CART细胞的胸膜内运输比全身给药更有效[]。通过进一步的T细胞遗传变异或与溶瘤病*结合使用CART细胞，对改善或排除T细胞进入肿瘤的过程的深入了解有望为增加CART细胞的运输提供机会[]。或其他方法，最终增强了肿瘤部位的炎症反应[]。可以修饰CART细胞以表达趋化因子特异性受体，尤其是CCR2和CCR4，它们肯定被肿瘤过度表达，从而支持它们与肿瘤细胞的有效接触（图5）[]。而不是常规将T细胞改造为特殊的癌症趋化因子谱，而是一种更可接受的方法是说服肿瘤释放趋化因子，而CART细胞以前对趋化因子有反应。已经使用一种溶瘤病*来将趋化因子CCL5转运至肿瘤细胞。CAR-T细胞通常表达RANTES受体，例如CCR1，CCR3和CCR5受体，在某些临床前研究中，将表达CCL5的溶瘤病*与工程CART细胞联合使用可有力地促进其生存能力和肿瘤清除率[，]。

--------------免疫抑制性肿瘤微环境-----------

用CART细胞疗法有效靶向实体瘤的另一个重要挑战是免疫抑制性肿瘤环境。与缺乏局部免疫抑制途径的许多血液系统恶性肿瘤不同，实体瘤可以被支持肿瘤生长，血管生成和转移的不同细胞类型强烈浸润[]。调节性T细胞（Treg），髓样来源的抑制细胞（MDSC）和M2肿瘤相关巨噬细胞（TAM）是肿瘤环境中最主要的免疫抑制细胞类型[，]。除肿瘤细胞外，这些细胞还通过在实体瘤（包括VEGF和IL-4，IL-10和TGFβ）中产生生长因子，局部细胞因子和趋化因子，促进肿瘤的生长和增殖。免疫检查点分子（例如CTLA-4和PD-1）也会降低抗肿瘤免疫力[，]。通常，具有多个细胞和抑制剂的肿瘤微环境可以限制CART细胞治疗的影响。大量研究集中在通过修改其代谢谱以改善敌对环境中的细胞活性来增强CART细胞功能。通常，肿瘤经常被高度腺苷和活性氧（ROS）所描述，从而破坏T细胞反应（图5）[，]。同样，肿瘤显示出升高的细胞外钾水平，从而显着减弱TCR驱动的Akt-mTOR磷酸化和随后的效应子活性。T细胞工程旨在增加钾通道的表达以准备更大的钾外流，从而成功地消除了这种抑制，并增强了TME中的T细胞功能[]。研究表明，在TME中，免疫抑制细胞的破坏通常是CART细胞高水平疗效所必需的。以抑制调节性T细胞（Tregs）以及髓样来源的抑制性细胞（MDSCs）为目的，将抑制性抗体与基因操作结合使用，可提高动物模型中T细胞治疗的疗效（图5）。[，]。另一方面，包括最常见类型的TME细胞并高度表达成纤维细胞活化蛋白（FAP）的癌症相关成纤维细胞（CAF）在塑造免疫抑制微环境和释放ECM蛋白以减*方面起着至关重要的作用。T细胞渗透。有趣的是，将FAP特异的CART应用于降低CAF细胞活性或工程化新型类型的旨在分泌ECM降解酶的CART细胞可以显着增加其运输和裂解肿瘤的潜力[]。否则，CART细胞分泌促炎细胞因子IL-12的操作可能会修饰TME，并最终增强巨噬细胞募集和功能[]。许多组织已尝试通过将ACT与TME调节剂联合使用来改善CART细胞活性。在肿瘤中显示出可接受的疗效的一种有希望的治疗方法是使用检查点抑制剂，其靶向PD-1/PD-L1或CTLA-4途径（图5）[，]。在这种情况下，通过改善肿瘤特异性T细胞的制备可以改善检查点封锁，并且可以合理地与CART细胞的过继传播结合起来，而在正常情况下可以提高*性风险。另一方面，特定的CART细胞经过工程改造，可通过CRISPR释放针对PD-1和LAG3的抗PD-L1抗体[，]。虽然抗CTLA-4抗体能够增加对癌症的内源性T细胞反应，但其促进CART细胞反应的相关机制尚不清楚。此外，抗CTLA-4抗体可在CTLA-4+Treg细胞减少后以细胞外在方式触发免疫反应，进而可能有助于CART细胞[]。

----------------未来方向和结论------------

CART细胞疗法的发展对于晚期恶性肿瘤尤其是血液疾病的患者是一种有前途的治疗选择。CART细胞的进展反映了来自各个科学领域的认识的融合；然而，迄今为止，成功仅限于B细胞异常。这种治疗方法对实体瘤的进展将需要基于对TME与肿瘤异质性相关联的障碍的认识的基础上，改进计划，该异质性是从复杂的逻辑工具和高重要性模型中出现的。这些方法将受益于我们建立转基因T细胞以支持新的所需活性，帮助它们靶向实体肿瘤细胞并在敌对环境中持续存在和发挥作用的能力。