本文是发表在《CellDeathandDisease》杂志上的文章。本研究旨在揭示人参皂苷Rg3（G-Rg3）对炎症介导的肝自噬的抑制作用，以抑制硫代乙酰胺（TAA）诱导的亚急性和慢性肝损伤引起的肝纤维化。研究表明：G-Rg3通过抑制TAA处理的小鼠和LPS刺激的HSC-T6细胞的自噬来发挥抗纤维化作用。这些数据共同揭示了G-Rg3可能是一种有效的抗肝纤维化药物。
实验设计：
为诱导亚急性肝损伤，将小鼠随机分为四组(n=10，每组)：正常组、TAA组和两组G-Rg3治疗组(5和10mg/kg)。根据我们的初步实验，建立了以mg/kg剂量为TAA的亚急性肝损伤模型。腹腔注射TAA在口服G-Rg3前2周，剂量为5或10mg/kg，共4周。
为诱导慢性肝纤维化，将小鼠随机分为四组(n=10，每组)：正常组、TAA组和两组G-Rg3治疗组(5和10mg/kg)。参考亚急性肝损伤模型，首次使用mg/kg，后期注射使用50mg/kg，每周两次，持续10周。在慢性肝纤维化模型中，口服G-Rg3，剂量为5或10mg/kg体重，持续4周。
观察指标：
肝功能和氧化应激指标测试、肝组织学检查、自噬诱导实验、PI3K信号研究实验。
研究结果：
1、G-Rg3对TAA所致的亚急性和慢性肝损伤有保护作用
TAA主要在肝脏中代谢，引起肝功能障碍。腹腔注射TAA4周或10周(TAA-慢性小鼠模型)后，肝脏发生严重的炎症浸润和纤维化。G-Rg3(5或10mg/kg)可显著改善肝功能，降低ALT和AST水平，降低TAA所致小鼠亚急性肝损伤的脂质过氧化。
2、G-Rg3能有效地逆转TAA小鼠和HSC-T6细胞的肝纤维化。
为了研究小鼠肝纤维化的进展，进一步测量了胶原沉积、HSCs激活标记α-SMA和促纤维化因子TGF-β1。G-Rg3(5或10mg/kg)可减轻TAA-慢性模型的肝组织病理变化，减少胶原纤维沉积，HSCs活化标记物(α-SMA)表达减少，促纤维化因子(TGF-β1)分泌减少，提示肝纤维化改善。因此，G-Rg3通过抑制HSCs的激活来预防TAA诱导的小鼠肝纤维化。
体外测试GRg3对HSC-T6细胞和L02细胞的影响。用G-Rg3预处理24h(2-16μM)可抑制HSC-T6细胞的活力，但不抑制L02细胞的活力。这些结果部分证实了我们的推测，G-Rg3降低了HSCs控制肝纤维化进展的活力，逆转了TAA诱导的肝纤维化。
3、G-Rg3通过抑制LPS诱导的自噬通量发挥抗纤维化作用。
考虑到纤维化因子TGF-β1与自噬的关系，我们进一步研究了自噬在TAA诱导的小鼠慢性肝纤维化中的作用。在慢性TAA组中，ATGs蛋白(ATG3、ATG5和ATG7)的表达高于对照组，表明慢性TAA暴露触发自噬通量，LC3a转化为LC3b。用G-Rg3处理可部分降低LC3b/a的比值和p62的表达。这些数据表明，G-Rg3的治疗在体内部分降低了自噬通量。
4、PI3K/Akt信号通路参与自噬通量介导的体内外肝纤维化
慢性TAA暴露后，PI3K和Akt的磷酸化降低，G-Rg3可逆转这些变化。G-Rg3能有效激活小鼠肝脏PI3K/Akt信号级联。同时，负自噬调节因子mTOR在G-Rg3组中磷酸化的程度高于TAA-慢性组，这表明G-Rg3给药抑制了自噬。同时，G-Rg3组负性自噬调节因子mTOR磷酸化程度高于TAA慢性组，表明G-Rg3对自噬有抑制作用。这一结果表明，G-Rg3激活了LPS诱导的HSC-T6细胞肝纤维化和自噬的Akt/mTOR信号通路。总之，GRg3抑制HSCs的激活，这可能是通过减少自噬通量的进展来实现的。
结论：
在本研究中，G-Rg3通过抑制HSCs的活化和促纤维化因子TGF-β1的释放，减轻TAA诱导的脂质过氧化和炎症浸润以及胶原纤维的沉积。G-Rg3依赖抑制HSC-T6细胞的存活，但不影响L02细胞的存活。G-Rg3通过激活PI3K/Akt级联信号在体内和体外抑制HSCs的存活。目前的实验揭示了G-Rg3可能作为一种新的自噬抑制剂和作为肝纤维化早期有效的肝保护药物。
参考文献：LiuX,MiX,WangZ,etal.GinsenosideRg3promotesregressionfromhepaticfibrosisthroughreducinginflammation-mediatedautophagysignalingpathway[J].CellDeathDisease,,11(6):.
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